目的 构建人粒 巨噬细胞集落刺激因子 (hGM CSF)真核表达载体pIRES1neo hGM CSF ,并观察其在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达。方法 用DNA重组技术 ,将hGM CSFcDNA插入到真核表达载体pIRES1neo的多克隆位点中 ,获得阳性重组载体pIRES1neo hGM CSF。以脂质体介导法转染人骨髓基质细胞系HFCL细胞 ,筛选获得的阳性细胞用Southernblot和Northernblot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录 ,用ELISA及依赖株 (TF 1)法检测其蛋白表达量和活性。结果 酶切鉴定表明成功地构建了重组真核表达载体pIRES1neo hGM CSF ;hGM CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中 ,在mRNA和蛋白质水平上均可检测到其表达 ;hGM CSF的表达量为 (5 6 .9± 0 .7)ng 10 6细胞 ,分泌量在细胞传代 30次后仍保持稳定 ,活性为 (6 .5 6± 0 .16 )× 10 3 U 10 6 细胞。结论 所构建的hGM CSF真核表达载体在人骨髓基质细胞系HFCL细胞中获得持续稳定表达 ,并具有良好的生物学活性 ,为细胞因子基因治疗的体内实验研究提供了实验依据。
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