目的建立鉴定布鲁杆菌属及种的膜基因芯片技术方法。方法试验菌株羊种标准株16M,牛种标准株544A,猪种标准株1330S;临床标本羊种81190,牛种80176、104M,猪种80177、19971、19972,共9个样本,均为中国疾病预防控制中心鼠布基地菌种库保存。提取各菌种DNA,进行PCR扩增,并以耶尔森菌O:9为对照。设计布鲁杆菌鞭毛蛋白基因flhA保守片段中两个位点(379、576)的单个核苷酸多态性探针,在探针中引物入生物素,并将探针固定在膜上,制成膜芯片,与目的片段进行杂交,用生物素显色技术检测目的片段。结果9个样本的扩增产物长度均为357 bp,与预期结果一致。与布鲁杆菌有相同抗原的耶尔森菌O:9无特异性PCR产物产生。在鞭毛蛋白基因序列379和576两个核苷酸位点上,猪种为379G和576C,牛种为379T和576T,羊种为379T和576C,与所设计探针序列完全相同。经膜基因芯片实验验证,猪种菌株在379G、576C及F位点(公共探针)显色;牛种菌株在379T、576T及F位点显色;羊种菌株在379T、576C及F位点显色。结论膜基因芯片可用于布鲁杆菌属和种的鉴定,且是一种优越的鉴定方法。
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