目的:探讨脐血单个核细胞的提取、冻存及复苏工艺,实现脐血单个核细胞的长久保存。方法:采集足月妊娠者脐血40~180ml,运用Ficoll密度梯度离心法和AXP脐带血自动分离系统与Ficoll密度梯度离心法两步法分离脐血单个核细胞,采用非程控降温法降温,将细胞保存于-196℃液氮中。比较分析不同分离方法分离人脐血单个核细胞的细胞得率及活力;冷冻保护液配制分2组:无血清培养液+10%DMSO+10%右旋糖酐和自体血浆+10%DMSO+10%右旋糖酐,根据冻存时间进行细胞复苏,分析其冻存前后的细胞活力、单个核细胞回收率、CD34+细胞数和CFU形成能力。结果:Ficoll密度梯度离心后获得的脐血单个核细胞活力为99.70%±0.30%,回收率为54.40%±4.52%;两步法分离脐血单个核细胞活力为99.60%±0.40%,回收率为62.12%±3.78%,2组回收率差异有统计学意义(P<0.05)。冻存6、12、24个月后,各时间点单个核细胞无血清培养液组复苏回收率和活力分别为80.75%±4.60%和91.75%±5.42%;自体血浆组复苏回收率和活力分别为81.55%±4.50%和92.65%±4.92%,组间差异无统计学意义。复苏后CD34+细胞占1.25%±0.70%,集落形成总数为(32.10±29.60)/105。结论:两步法分离脐血单个核细胞的回收率高于一步法,两种保护液的保护效果无显著差异。
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