目的构建鼠双微粒体-2基因(MDM2)靶向小分子干扰RNA(siRNA)质粒,研究其对人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其在肝癌基因治疗中的可行性。方法构建MDM2的siRNA真核表达载体pSilencer-siRNA-MDM2(siMDM2),建立裸鼠荷瘤模型,分别给予阴性对照质粒和siMDM2质粒处理。监测肿瘤生长变化,RT-PCR、western blot方法检测MDM2及p53 mRNA和蛋白的表达变化。正态分布数据的组间比较用单因素方差分析及LSD检验。结果裸鼠体内实验结果显示,转染siMDM2-1和siMDM2-2组与对照组相比,肿瘤增长受到明显抑制,抑瘤率分别为60.6%和54.6%。RT-PCR和Western blot结果示MDM2的mRNA和蛋白质表达下调,而p53的mRNA和蛋白质表达上调。与空白组比较,转染siMDM2-1和siMDM2-2组的MDM2mRNA表达分别下调62.8%和61.6%,MDM2蛋白表达分别下调60.7%和59.5%;p53 mRNA表达分别上调47.1%和45.6%,p53蛋白表达分别上调45.9%和44.3%,差异均具有统计学意义(F值分别为75.099、47.860、17.676和235.770,P值均<0.01)。结论 siRNA沉默MDM2基因能抑制人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,可能与其在体内有效下调MDM2和上调p53的mRNA及蛋白质表达有关。
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