目的:研究降低Smad4表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中Smad4 mRNA表达水平;Smad4-shRNA与Scramble-shRNA质粒分别稳定转染Smad4高表达MCF-7细胞,实验分为未转染MCF-7细胞组(正常对照组),采用Smad4基因沉默组和Scramble组(阴性对照组);采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测增殖相关基因CDKN1A、CDK1和CDK2以及凋亡相关基因Suvivin、bcl-2、caspase 3和caspase 9mRNA表达水平。结果:各组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05),各组细胞CDKN1A、CDK1和CDK2mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);与正常对照组和阴性对照组比较,Smad4基因沉默组细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Smad4基因沉默组细胞Suvivin和bcl-2mRNA表达水平明显升高(P<0.01),caspase 3和caspase 9mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:Smad4可以通过下调Suvivin和bcl-2的表达、上调caspase 3和caspase 9表达引起细胞凋亡。
(8.0+极速模式)